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    如何提高磷酸鈣轉(zhuǎn)染的效率?

    發(fā)布時(shí)間: 2021-10-11  點(diǎn)擊次數(shù): 1442次

    提高磷酸鈣轉(zhuǎn)染法效率的共通步驟,目的都是為了避免產(chǎn)生會(huì)被細(xì)胞內(nèi)吞、加工失效的大顆粒沉淀。


    提高轉(zhuǎn)染效率的操作有以下這些:

    1、將小分子DNA整合在高分子質(zhì)量基因組DNA上,以大分子作為運(yùn)載體,能提高轉(zhuǎn)染效率。


    2、測(cè)試緩沖液適合的ph,可制備幾批pH范圍為6.90~7.15的HEPES鹽緩沖液,分別測(cè)試緩沖效率,找到最適pH值。


    3、使用轉(zhuǎn)染促進(jìn)劑,如甘油、氯喹、其他可購(gòu)買(mǎi)的轉(zhuǎn)染促進(jìn)劑。因?yàn)檫@些試劑對(duì)細(xì)胞有一定毒性,因此,應(yīng)針對(duì)每種細(xì)胞系通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定轉(zhuǎn)染促進(jìn)劑處理的最佳時(shí)機(jī)、時(shí)長(zhǎng)和強(qiáng)度。


    除了這些共通的步驟,不同廠家還會(huì)對(duì)混勻DNA和磷酸鈣的速度有要求。有些方法要求只能輕輕攪動(dòng),有些建議用移液器溫和吹吸混勻,有些則提倡應(yīng)緩慢混合。


    因此,在使用磷酸鈣轉(zhuǎn)染時(shí),應(yīng)針對(duì)不同試劑和細(xì)胞系,耐心調(diào)整實(shí)驗(yàn)參數(shù),才是獲得高轉(zhuǎn)染效率的關(guān)鍵。


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