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原代細胞轉染試劑的轉染效率受何因素影響？
發(fā)布時間： 2022-01-05 點擊次數： 1054次細胞轉染是指將外源分子如DNA、RNA等導入真核細胞的技術。隨著分子生物學和細胞生物學研究的不斷發(fā)展，轉染技術已成為研究和控制真核細胞基因功能的常規(guī)工具。在研究基因功能、調控基因表達、突變分析和蛋白質生產等生物學試驗中，其應用越來越廣泛。原代細胞轉染試劑可轉染極度難轉染的免疫細胞、懸浮細胞，如T細胞、NK細胞、人淋巴細胞、THP-1等；可高效率轉染siRNA到任何哺乳動物細胞。用于將DNA和siRNA轉染到真核細胞系和各種原代細胞中；轉染細胞后可10小時內快速代謝的第三代新轉染試劑。原代細胞轉染試劑的轉染效率受以下因素影響：1.細胞培養(yǎng)物健康的細胞培養(yǎng)物是成功轉染的基礎。不同細胞有不同的培養(yǎng)基，血清和添加物。低的細胞代數能確保基因型不變。高的轉染效率需要一定的細胞密度，一般的轉染試劑都會有專門的說明。推薦在轉染前24小時分細胞，這將提供正常細胞代謝，增加對外源DNA攝入的可能。一定要避免細菌，支原體或真菌的污染。2.血清大多數培養(yǎng)基在使用前需要加血清。胎牛血清經常用到，便宜一點的有馬或牛血清。通常的，血清是一種包含生長因子及其它輔助因子的不確切成分的添加物，對不同細胞的生長作用有很大的差別。血清質量的變化直接影響轉染效率。因此在轉染前建議先測(轉右)試出對細胞生長良好的血清批號，轉染時用同一批號的血清，并同時做負對照以測試細胞生長是否正常。有些轉染技術如脂質體轉染在有血清存在情況下效率很低，因此在轉染前要除血清。但有些對此敏感的細胞如原代細胞會受到損傷，甚至死亡導致轉染效率極低。3.載體構建轉染載體的構建也影響轉染結果。病毒載體對特定宿主細胞感染效率較高，但不同病毒載體有其特定的宿主，有的還要求特定的細胞周期，如逆轉錄病毒需侵染分裂期的宿主細胞，此外還需考慮一些安全問題。除載體構建外，載體的形態(tài)及大小對轉染效率也有不同的影響，如前面提到的超螺旋及線性DNA對瞬時和穩(wěn)定轉染的影響。如果基因產物對細胞有毒性作用，轉染也很難進行，因此選擇組成或可調控，強度合適的啟動子也很重要，同時做空載體及其它基因的相同載體構建的轉染正對照可排除毒性影響的干擾。4.DNA質量DNA質量對轉染效率影響非常大。一般的轉染技術基于電荷吸引原理，如果DNA不純，如帶少量的鹽離子、蛋白、代謝物污染都會顯著影響轉染復合物的有效形成及轉染的進行。5.轉染技術轉染技術的選擇對轉染結果影響也很大，許多轉染方法需要優(yōu)化DNA與轉染試劑比例，細胞數量，培養(yǎng)及檢測時間等。
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