国产午夜精品一区二区,50岁退休熟女露脸高潮,亚洲最大的成人网站,久久无码人妻一区二区三区

銷售熱線

19126518388
  • 技術(shù)文章ARTICLE

    您當前的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 消滅 PCR 非特異性擴增的方法

    消滅 PCR 非特異性擴增的方法

    發(fā)布時間: 2023-06-28  點擊次數(shù): 1206次
    非特異性擴增,即進行 PCR 所擴增出來的條帶不是所要的,引物與模板在非目的條帶處有錯配,導(dǎo)致延伸產(chǎn)物不是目的條帶。例如引物二聚體,即引物在退火過程中產(chǎn)生了 hairpin 結(jié)構(gòu)或其他二級結(jié)構(gòu),或者引物在模板的某些位置非特異性地結(jié)合,也同樣會產(chǎn)生非特異性擴增。PCR 產(chǎn)物都是通過引物延伸產(chǎn)生的。當引物產(chǎn)生了二聚體或者非特異性擴增產(chǎn)物之后,引物本身就無法再延伸形成 PCR 產(chǎn)物了,這樣的情況下,非特異性擴增產(chǎn)物越是多,那目的產(chǎn)物就越是少。如果在 qPCR 過程中,就會在熔解曲線中形成雙峰。

    消滅 PCR 非特異性擴增的方法:
    1、引物設(shè)計的過程中要用 Primer premier 5.0 來驗證一下二聚體;
     
    2、 引物合成后,先做一次梯度 PCR,檢測最合適的退火溫度,一般高退火溫度可以提高引 物對模板的特異性從而降低引物二聚體;
     
    3、 降低 Mg2+濃度,鎂離子濃度高,會導(dǎo)致大量的非特異性擴增,但是沒有鎂離子的話,也會導(dǎo)致 Taq 酶的失活;
     
    4、降低 dNTP 濃度,dNTP 也是非特異性擴增的一個罪魁禍首,降低它的濃度,也能有效降低二聚體及其他非特異性擴增;
     
    5、降低引物濃度,一般的 PCR 引物都是過量的,降低了引物濃度自然也能降低引物之間形成二級結(jié)構(gòu)的可能性;
     
    6、提高退火溫度,這個道理很簡單,引物的退火溫度提高,引物間的二級結(jié)構(gòu)形成可能性就會降低;
     
    7、延長退火時間,這個也可以減弱引物間結(jié)合的可能性;
     
    8、DMSO 及甜菜堿,這些 PCR 促進劑,主要是用于 CG 含量高的模板上,降低 DNA 的二級結(jié)構(gòu)的產(chǎn)生,但根據(jù)經(jīng)驗,加入 DMSO 之后需要同時提高一點退火溫度來補平(qPCR 不太適用);
     
    9、熱啟動法,通過 95℃的高溫熱啟動,高溫解鏈,使得引物間的二級結(jié)構(gòu)破壞,以此降低二聚體產(chǎn)生。


    深圳安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實力、壹流的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)。總部設(shè)在廣東,服務(wù)面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司,旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供壹流的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線,在各個領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供世界前沿水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品,安培生物致力于為廣大的科研機構(gòu)、高等院校等優(yōu)質(zhì)客戶提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)。


產(chǎn)品中心 Products
日本漫画工囗全彩内番漫绅士| 少妇高潮一区二区三区99| 办公室扒开奶罩揉吮奶头a片小说| 先锋av资源| 男人撕开奶罩揉吮奶头gif| 高潮a片www张柏芝陈冠希| 欧美另类vivox21老少配| 国产精品9999久久久久仙踪林| 欧美jizz18性欧美| 天天躁日日躁狠狠躁av麻豆| 国产精品9999久久久久仙踪林| 国产精品99亚发布| 午夜精品久久久久久久久| 男男高潮(h)互攻| 少妇把腿扒开让我爽爽视频| 间谍过家家第二季在线观看免费| 国产熟女老妇300部mp4| 色戒完整版无删减158分钟hd| 亚洲av中文无码乱人伦在线观看| 亚洲熟女av中文字幕男人总站| 美女视频黄频| 变态抽搐顶弄h| 在线免费看电影| 国产精品久久久久久久| 久久国产精品99久久久久久| 美妙人妇系列1~100| 门卫老头吮她的花蒂在线观看| japanese丰满人妻hd| 国产av国产av在在免费线| 69久久久久精品9999不卡片| 少妇真实被内射视频三四区| 绝顶高潮合集videos| 国产熟女高潮精品视频av| 欧美精品一区二区少妇免费a片| 粉嫩名器少妇名器| 被群cao的合不拢腿h纯肉视频| 成年免费a级毛片免费看无码| chinese国产avvideoxxxx实拍| 熟女肥臀白浆大屁股一区二区| 国精产品一区一区三区有限公司| 我和闺蜜在ktv被八人伦|